Introduction
Les méthodes bactériologiques traditionnelles sont souvent fastidieuses. En comparaison, la méthode iQ-Check Listeria monocytogenes constitue un test qualitatif rapide et simple permettant la détection de Listeria monocytogenes dans les échantillons environnementaux et les produits alimentaires. Grâce à la technique d’amplification en chaîne par polymérase (PCR) en temps réel, la séquence d’ADN spécifique de L. monocytogenes est amplifiée et détectée simultanément au moyen d’une sonde fluorescente. Il est possible de traiter jusqu’à 94 échantillons, avec un risque minimum de contamination et une procédure d’utilisation aisée. Ce kit est destiné au personnel de laboratoire qualifié, qui réalise des tests de détection de L. monocytogenes. La mise en œuvre de ce test permet l’obtention de résultats en quelques heures après l’enrichissement d’un échantillon.

Technologie iQ-Check L. monocytogenes II
Le kit iQ-Check Listeria monocytogenes II est un test basé sur l'amplification et la détection des gènes par PCR en temps réel. Les réactifs PCR prêts à l'emploi de ce kit contiennent des oligonucléotides (amorces et sondes) propres à L. monocytogenes, ainsi que de l'ADN polymérase et des nucléotides. La détection et l'analyse des données sont optimisées pour une utilisation avec un instrument de PCR en temps réel Bio-Rad, comme le système de détection par PCR en temps réel CFX96 Touch Deep Well.

La PCR est une technique performante utilisée pour générer de nombreuses copies d'ADN cible. La réaction de PCR se compose de cycles de chauffage et de refroidissement pour dénaturer l'ADN, suivis de l'hybridation d'amorces avec une région cible spécifique. L'ADN polymérase utilise ensuite ces amorces et désoxyribonucléosides triphosphates (dNTP) pour allonger l'ADN, et crée ainsi des copies de l'ADN cible. Ces copies sont appelées amplicons.

Au cours de la PCR en temps réel, des sondes spécifiques détectent l’ADN en s’hybridant avec les amplicons. Ces sondes sont liées à un fluorophore qui produit une fluorescence uniquement lors d’une hybridation avec la séquence cible. FAM est le fluorophore lié à la sonde qui s’hybride à la séquence d’ADN spécifique d’L.monocytogenes. En l'absence d'ADN cible, aucune fluorescence ne sera détectée.

Étant donné que le nombre d'amplicons augmente avec chaque cycle d'amplification, l'intensité de la fluorescence augmente également. Le module optique mesure cette fluorescence à l'étape d'hybridation pour chaque cycle de PCR tandis que le logiciel associé enregistre l'intensité de la fluorescence en fonction du nombre de cycles.
Le mélange réactif du kit comprend un contrôle interne d'ADN synthétique. Il est amplifié avec une sonde spécifique en même temps que la séquence d'ADN cible d’L. monocytogenes et détecté par un second fluorophore.

Composants du kit :
Le kit iQ-Check Listeria monocytogenes II contient la quantité de réactifs suffisante pour 96 tests (94 échantillons).
A - Réactif de lyse, 1 flacon, 20 ml
B - Sondes fluorescentes, 1 tube, 0,55 ml
C - Mélange d'amplification, 1 tube, 4,4 ml
D - Contrôle négatif PCR, 1 tube, 0,5 ml
E - Contrôle positif PCR, 1 tube, 0,25 ml
F - Billes de lyse, 1 flacon, 17,6 ml

Durée de conservation et stockage
Après réception, le kit doit être stocké à 2–8°C. Les réactifs stockés à cette température peuvent être utilisés jusqu'à la date d'expiration indiquée sur les tubes. La durée de conservation du réactif de lyse est de 6 mois après mélange avec les billes.