DOMAINE D’UTILISATION
Le bouillon au thioglycolate avec résazurine est couramment utilisé pour les contrôles de stérilité des produits biologiques et pour les cultures des germes aérobies, anaérobies et microaérophiles. Le milieu est conforme aux exigences de la Pharmacopée européenne pour effectuer les tests de stérilité et de l’AOAC pour l’analyse bactériologique des antibiotiques et la détermination de l’effet sporicide des désinfectants. Le milieu est également utilisé en microbiologie alimentaire pour la culture des Clostridium, en vue de la confirmation de Clostridium perfringens.
La formule type répond à la composition définie dans la Pharmacopée européenne et dans la norme NF EN ISO 7937.
HISTORIQUE
Brewer a démontré l’intérêt de ce milieu pour la culture des germes anaérobies en présence de thioglycolate de sodium. Nungester, Hood et Warren ont ensuite mis en évidence que le thioglycolate de sodium neutralisait l’effet inhibiteur des composés mercuriques présents dans les échantillons à analyser. Malin et Finn observèrent qu’en présence de glucides, le thioglycolate possédait un léger effet inhibiteur sur quelques microorganismes.
PRINCIPES
La peptone pancréatique de caséine, l’extrait de levure, la cystine et le glucose assurent la croissance d’une grande variété de microorganismes aérobies et anaérobies.
Le thioglycolate de sodium, à une concentration de 0,05 %, abaisse le potentiel d’oxydo-réduction sans avoir d’effet toxique. En outre, il neutralise le pouvoir antibactérien des dérivés mercuriques utilisés comme conservateurs de produits biologiques.
La présence d’agar favorise le développement des bactéries anaérobies en stabilisant le milieu contre les courants de convection, de façon à maintenir l’anaérobiose dans la partie inférieure des récipients.
La résazurine, moins toxique que le bleu de méthylène, est utilisée comme indicateur d’oxydo-réduction : incolore en milieu réducteur, elle devient rose en milieu oxydé.
FORMULE-TYPE
La composition peut être ajustée de façon à obtenir des performances optimales.
Pour 1 litre de milieu :
- Tryptone : 15,00 g
- Extrait autolytique de levure : 5,00 g
- Glucose monohydraté : 5,50 g
- Chlorure de sodium : 2,50 g
- Thioglycolate de sodium : 0,50 g
- L-cystine : 0,50 g
- Résazurine : 1,0 mg
- Agar agar bactériologique : 0,75 g
pH du milieu prêt-à-l’emploi à 25°C : 7,1 ± 0,2.
PREPARATION
- Mettre en suspension 29,7 g de milieu déshydraté (BK017) dans 1 litre d’eau distillée ou déminéralisée.
- Porter lentement le milieu à ébullition sous agitation constante et l’y maintenir durant le temps nécessaire à sa dissolution complète.
- Répartir en tubes à raison de 10 mL par exemple ou en flacons.
- Stériliser à l’autoclave à 121°C pendant 15 minutes.
- Refroidir le milieu à température ambiante.
MODE D’EMPLOI
Test de stérilité
- Ensemencer l’échantillon à analyser, selon les règles d’usage définies dans la pharmacopée, dans les tubes ou flacons ainsi préparés.
- Incuber pendant au moins 14 jours à 30-35°C.
Confirmation des Clostridium perfringens (NF EN ISO 7937) :
- Prélever une colonie noire et la transférer dans 10 mL de bouillon ainsi préparé.
- Incuber en anaérobiose pendant 18 à 24 heures à 37°C ± 1°C.
- Transférer 5 gouttes de chaque culture obtenue dans un tube de milieu LS (BK140) et suivre le protocole de confirmation.
Note : Si, avant ensemencement, le milieu présente une coloration rose (signe d’oxydation) de plus de 1/3 de la hauteur à partir de la surface, restituer les conditions d’anaérobiose en le chauffant à 95-100°C pendant 10 minutes.
Ne pas effectuer cette opération plus d’une fois.
CONTROLE QUALITE
Milieu déshydraté : poudre blanc-crème, fluide et homogène.
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