BD-BBL Oxidase Reagent Droppers

APPLICATION
Les BD BBL Oxidase Reagent Droppers (compte-gouttes pour le réactif d’oxydase) sont utilisés dans la réaction qualitative du test d’oxydase de Kovacs pour identifier les pathogènes non fermentants et diverses bactéries Gram négatives.1,2

RESUME ET EXPLICATION
Le test d’oxydase est basé sur la production d’une enzyme, l’indophénol oxydase. Cette enzyme oxyde une teinture redox (présente dans le réactif) qui donne lieu à un changement de coloration du jaune vers le pourpre foncé.1,2

PRINCIPES DE LA METHODE
En présence d’oxygène atmosphérique, l’indophénol oxydase oxyde le réactif d’oxydase phénylènediaminé pour former un composé de couleur pourpre foncé, l’indophénol.1,2

REACTIFS
Les BD BBL Oxidase Reagent Droppers contiennent 0,5 mL d’une solution aqueuse à 1 % de dihydrochlorure de N,N,N’,N’-tétraméthyl-p-phénylènediamine contenant des agents assurant une stabilité maximale.

Avertissements et précautions :
Réservé au diagnostic in vitro.
Eviter tout contact avec la peau. Rincer soigneusement à l’eau en cas de déversement.
Instructions pour la conservation : Stocker à température ambiante contrôlée entre 15 et 30 °C.
Garder à l’abri de la lumière. Les compte-gouttes pour réactifs ne nécessitent aucune réfrigération.
Détérioration du produit : Ce réactif est hermétiquement scellé dans une ampoule assurant une protection contre une instabilité chimique de la solution jusqu’à la date de péremption. Ne pas utiliser si la couleur du réactif n’est pas jaune clair.

METHODE
Matériaux fournis : BD BBL Oxidase Reagent Droppers.
Matériaux requis mais non fournis : Milieux de culture auxiliaires, papier filtre, organismes de contrôle de qualité et matériel de laboratoire requis par cette procédure.

Mode opératoire du test :
1. Tenir le compte-gouttes du réactif verticalement et POINTER L’EXTREMITE A L’OPPOSE DE SOI. Saisir le milieu entre le pouce et l’index et presser doucement afin de casser l’ampoule à l’intérieur du compte-gouttes. Attention : Briser l’ampoule en son centre une fois seulement.
Ne plus manipuler le compte-gouttes car le plastique pourrait se percer et le bris de verre pourrait occasionner des blessures.
2. Tapoter le fond sur la paillasse plusieurs fois. Ensuite, renverser l’instrument pour que le réactif s’écoule goutte à goutte.
3. Préparation pour le test
a. Les colonies à analyser doivent être isolées des autres colonies.
b. L’utilisation d’isolats frais (cultures de 18 à 24 h) est recommandée pour les tests habituels.
c. Si les cultures ont été réfrigérées, les laisser atteindre la température ambiante avant le test.
Remarque : Les résultats obtenus peuvent être affectés par différentes conditions. Voir les conditions figurant dans « Limites de la procédure ».
4. Exécution du test - Méthode avec papier filtre
a. Ajouter quelques gouttes de réactif pour test à l’oxydase sur une bande de papier filtre (Whatman No 1 ou équivalent).
b. Ensemencer par striation une pleine anse de bactéries sur le papier imbibé de réactif. Utiliser une anse bactériologique en platine ou un bâtonnet applicateur en bois. L’utilisation d’anses en acier ou en nichrome peut donner des réactions faussement positives.2
Contrôle de qualité par l’utilisateur :
Il est recommandé d’exécuter les contrôles positifs (Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853) et négatifs (Escherichia coli ATCC 25922) avec l’organisme à tester simultanément.3
Effectuer les contrôles de qualité conformément à la réglementation nationale et/ou internationale, aux exigences des organismes d’homologation concernés et aux procédures de contrôle de qualité en vigueur dans l’établissement. Il est recommandé à l’utilisateur de consulter les directives CLSI et la réglementation CLIA correspondantes pour obtenir des informations  appropriées sur les modalités du contrôle de qualité.

RESULTATS
Les résultats positifs font virer les bactéries de violet à pourpre immédiatement ou en 30 s. Les réactions négatives demeurent incolores ou prennent une teinte légèrement rose ou pourpre après 30 s. Toute réaction retardée doit être ignorée.

LIMITES DE LA PROCEDURE
Attendre 30 s au plus pour une réaction positive. Toute réaction retardée doit être considérée négative.
Ne pas mettre trop de réactif car la réaction pourrait pâlir avec des organismes positifs pour l’oxydase.
Une anse en acier, en nichrome et en fil contenant du fer peuvent donner une réaction faussement positive.3
Une anse en platine ou un bâtonnet applicateur en bois est recommandé.
Pour garantir la validité des résultats, le test de l’oxydase sur des bacilles Gram négatifs doit être exclusivement effectué sur des colonies issues de milieux non sélectifs et/ou non différentiels. Les milieux sélectifs ou différentiels peuvent transporter l’indicateur sur le papier filtre et provoquer des résultats erronés (réactions faussement négatives).2
Les colonies cultivées sur milieu avec des concentrations élevées de glucose peuvent inhiber l’activité de l’oxydase.3
Des résultats faussement négatifs peuvent survenir avec des cultures mélangées contenant les deux genres de Pseudomonas et de Neisseria (les espèces de Pseudomonas ne produisent pas toutes de l’oxydase).2
Le chronométrage est d’importance extrême pour l’interprétation des résultats.2
Ne pas tester d’organismes strictement anaérobiques.2
Les colonies visqueuses peuvent apparaître négatives en raison d’une mauvaise pénétration du réactif.
Les réactions d’organismes faiblement positifs à l’oxydase, par exemple les espèces de Pasteurella, peuvent donner des résultats inexacts. Lorsque des résultats ne concordent pas avec d’autres réactions biochimiques ou avec les organismes, il faut répéter le test.

CARACTERISTIQUES DE PERFORMANCES 4
Le test de l’oxydase de Kovacs a été appliqué à 1 660 souches de divers genres, dont 210 ont donné une réaction positive et 64 une réaction positive retardée. Les espèces des genres Neisseriaceae et Pseudomonadaceae se sont généralement avérées positives à l’oxydase, tandis que les espèces Enterobacteriaceae et, à quelques exceptions près, les organismes Gram positifs, se sont avérés négatifs. Les Brucellaceae et le genre Bacillus ont donné des résultats équivoques.