Kit se composant de :
Gram Crystal Violet Pour la coloration différentielle des bactéries : 1 flacon de 250 ml,
Gram Iodine (stabilisé) : 1 flacon de 250 ml,
Gram Decolorizer : 1 flacon de 250 ml,
Gram Safranin : 1 flacon de 250 ml,

APPLICATION
Les trousses et réactifs Gram Stain sont utilisés pour colorer les microorganismes des cultures ou des échantillons par la méthode de Gram différentielle.

RESUME ET EXPLICATION
La coloration de Gram a été mise au point en 1884 par Christian Gram alors qu’il tentait de différentier les cellules bactériennes de tissus infectés. Bien qu’ayant observé ce qu’on appelle aujourd’hui la « réaction de Gram », Gram n’a pas reconnu la valeur taxonomique de sa technique.
La coloration de Gram est utilisée aujourd’hui pour différentier les bactéries intactes et morphologiquement similaires en deux groupes sur la base de la couleur des cellules après coloration. De plus, la forme, la taille et les détails structurels des cellules sont mis en évidence. Ces informations préliminaires fournissent des indices importants sur le type des organismes présents et sur les techniques plus approfondies requises pour les caractériser.
Comme la solution iodée inorganique s’oxyde rapidement et perd de son efficacité de mordant. Le "Gram Stain Kit" (réf.212539-BD/6334461-LF) diffère de la formule originale de Gram en proposant un complexe iodé organique plus stable : L-polyvinylpyrrolidone-iode.

PRINCIPES DE LA METHODE
La méthode de coloration de Gram comprend les étapes suivantes :
- Coloration d’un frottis fixé au cristal violet.
- Application d’une solution iodée servant de mordant.
- Décoloration du colorant primaire à l’alcool/acétone ; et contre-colorant à la safranine ou à la fuchsine basique.

Un complexe cristal violet-iode se forme dans le protoplaste (et non dans la paroi cellulaire) de tous les organismes marqués par cette méthode. Les organismes capables de conserver ce complexe de marquage après la décoloration sont classés Gram positifs tandis que ceux capables d’être décolorés et contre-colorés sont classés Gram négatifs.
Lors de la rupture ou du retrait de la paroi cellulaire, le protoplaste de cellules Gram positives (et Gram négatives) peut être décoloré et l’attribut Gram positif perdu. Ainsi, le mécanisme de la coloration de Gram apparaît lié à la présence d’une paroi cellulaire intacte afin de servir de barrière à la décoloration du colorant primaire.
En règle générale, la paroi cellulaire est non sélectivement perméable. Il est admis en théorie que pendant la méthode de coloration de Gram, la paroi cellulaire de cellules Gram positives est déshydratée par l’alcool présent dans le décolorant et perd de sa perméabilité, permettant ainsi de conserver le colorant primaire. Toutefois, la paroi cellulaire des cellules Gram négatives présente un contenu de lipides plus élevé et devient plus perméable une fois traitée à l’alcool, entraînant une perte du colorant primaire.
La base moléculaire pour la coloration de Gram n’a pas été encore déterminée.

PRELEVEMENT ET PREPARATION DES ECHANTILLONS
Appliquer l’échantillon de test à une lame de verre propre afin d’aboutir à un frottis uniforme finement étalé.
Emulsifier les colonies obtenues d’une culture de 18 à 24 h dans une solution saline pour obtenir la densité appropriée.
Laisser le frottis sécher à l’air.